Polar MC IMAC 亲和填料

　　Polar MC-IMAC 填料是一种金属亲和填料,适用于纯化带有组氨酸 ( His ) 标签的重组蛋白，这类重组蛋白广泛应用于生物技术领域。该填料以亲水性聚甲基丙烯酸酯微球为基质，粒径为 30 μm 或 60 μm,孔径为 800 Å，具有较高的物理和化学稳定性。填料表面具 有高度的亲水性,最大程度地避免了与生物类样品的非特异性吸附。在亲水性表面,以专有连接物链接了能螯合多价金属离子的羧酸基团。

　　Polar MC-IMAC 填料有两种类型 : 游离酸型(Polar MC30-CA Excel 或 Polar MC60-CA Excel，羧酸 ) 和螯合镍离子型 ( Polar MC30-Ni Excel 或Polar MC60-NiExcel)。游离酸型可用于金属离子去除,也可根据客户要求定制他金属离子型填料。这两种类 型的 IMAC 填料结构如图 1 所示。

填料结构

图1a. Polar MC30/60-CA Excel的化学结构

图1b. Polar MC30/60-Ni Excel的化学结构

　　该填料高度稳定,可耐受 0.5 M NaOH 接近 100次清洗循环。螯合金属离子的填料能在 0.1 M 乙二胺四乙酸 (EDTA) 的清洗条件下不损失金属离子,因此每次使用后无需再补充金属离子。这两种填料都可以散装、 FPLC 柱或常规 HPLC 柱的形式提供。

技术参数

应用案例

　　将 300 mL 组氨酸标记蛋白粗品上样到以 PolarMC60-Ni Excel 装填 15x220 mm 赛分Generik FPLC柱(货号202000-1525-AF)中。用上样缓冲液清洗后，靶蛋白用含0.5 M咪唑的25 mM磷酸钠缓冲液（pH8），以 7.5 mL/min 的流速洗脱（图 2）。

图2. 组氨酸标记蛋白在Polar MC60-Ni Excel上的纯化实例

上样：溶解在25 mM磷酸盐(pH8) + 0.5M氯化钠缓冲液的组氨酸标记蛋白粗品以5.0 mL/min的流速上样；

淋洗：再用25 mM磷酸盐(pH8) + 0.5 M氯化钠缓冲液洗涤色谱柱；

洗脱：用含0.5 M咪唑的25 mM磷酸盐(pH8) + 0.5 M氯化钠缓冲液洗脱组氨酸标记蛋白， 并收集纯化组分、 淋洗液及上样流穿液。

　　收集的馏分用10%三甘氨酸SDS-Pages确认（ 图3 ）。

图3. SDS-Pages分析从图2所示纯化中收集的组分

泳道1：分子量阶梯

泳道2：组氨酸标记蛋白粗品

泳道3：样品上样后的流穿液

泳道4：上样后清洗色谱柱的淋洗液

泳道5：洗脱靶蛋白的0.5 M咪唑洗脱液

　　IMAC 填料在 90 倍柱体积的 0.5 M NaOH 溶液清洗后表现出耐碱性和可重复使用性 ( 图 4）。用0.5 M NaOH 溶液以 0.25 倍柱体积 /min 的流速进行 30 次循环洗涤,总接触时间为 2 小时后,重复使用该填料纯化相同的组氨酸标记蛋白,结果表 明填料的结合性能保持不变。

图4. 耐碱性和可重复使用性实验

泳道 1：分子量阶梯

泳道 2：组氨酸标记蛋白粗品

泳道 3：收集的流穿液作为样品上样到新色谱柱上

泳道 4：用新镍柱洗脱靶蛋白的洗脱液

泳道 5：用 30 倍柱体积的 0.5 M NaOH 溶液以 0.25 柱体积 /min 的流速清洗，总接触时间达 2 小时后，收集到的流穿液

泳道 6：用 30 倍柱体积的 0.5 M NaOH 溶液清洗镍柱后，靶蛋白的洗脱液

泳道 7：用 60 倍柱体积的 0.5 M NaOH 溶液以 0.25 柱体积 /min 的流速清洗，总接触时间达 4 小时后，收集到的流穿液

泳道 8：用 60 倍柱体积的 0.5 M NaOH 溶液清洗镍柱后，靶蛋白的洗脱液

泳道 9：用 90 倍柱体积的 0.5 M NaOH 钠溶液以 0.25 柱体积/min 的流速清洗，总接触时间达 6 小时后，收集到的流穿液泳道 10：用 90 倍柱体积的 0.5 M NaOH 钠溶液清洗镍柱后，靶蛋白的洗脱液

预装柱规格为1、4.2、5 mL，包装规格为5 L以下及5 L、10 L、50 L

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注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途