其它生化试剂
Rosetta(DE3)感受态细胞
| 品牌 | 厂商性质 | 产地 | 货期 |
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产品介绍
试剂盒介绍
大肠杆菌经Ca离子处理后可摄取外源DNA（Plasmid、Phage DNA），处于这种状态的细胞称作感受态细胞（Competent Cells）。
该感受态细胞用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。该菌株是携带氯霉素抗性质粒BL21的衍生菌，补充大肠杆菌缺乏的6种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA,CCC, GGA)对应的tRNA，提高外源基因、尤其是真核基因在原核系统中的表达水平。使用pUC57 质粒检测，转化效率可达107。
使用方法
(1) 将100μl感受态细胞于冰上解冻。应注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。
(2) 取5μl连接产物加入到感受态细胞中，轻轻旋转几次以混匀内容物。在冰上放置30分钟。
(3) 将管放入预加温到42℃的水浴中，热激90秒。快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却2~3分钟。该过程不要摇动离心管。
(4) 每管中加900μl LB(SOC)培养基(不含抗生素)，37℃振荡培养1小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
(5) 室温4,000rpm离心5分钟，弃去900μl上清后，用剩余100μl培养基重悬细胞并涂布到LB琼脂平板表面。
(6) 将平板置于室温直至液体被吸收。
(7) 倒置平皿，于37℃培养，12~16小时后可出现菌落。
储存条件
-70℃冻存
基因型
F-ompT hsdSB(rB- mB-) gal dcm lacY1 (DE3) pRARE (argU, argW, ileX, glyT, leuW, proL) (CmR)
试剂盒内容
| 组 成 | KT1003-01 | KT1003-02 |
| 感受态细胞 | 10×100μl | 20×100μl |
| pUC57 (0.1ng/μl) | 10μl | 10μl |
注意事项
(1) 感受态应保存在-70℃，不可多次冻融和放置时间过长，运输过程中应放入干冰中。
(2) 实验操作过程应严格无菌，防止其他DNA的污染，以免为以后的筛选、鉴定带来影响。
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注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途