UCutter酶
| 品牌 | 厂商性质 | 产地 | 货期 |
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概述
U Cutter酶是一种特异性切割尿嘧啶的酶，它能在含有尿嘧啶DNA碱基处产生单核苷酸缺口。
应用
1.PCR产物克隆。
2.在含尿嘧啶DNA链中产生单核苷酸缺口。
来源
E. coli菌株重组表达。
活性单位定义
在10μl的1×T4 DNA Ligase反应缓冲体系中，37°C反应15min，能使10pmol荧光标记的34bp双链寡核苷酸产生切割所需要的酶量定义为一个单位。
贮存条件
12.5mMTris-HCl(PH7.5), 33mM KCl, 33mM NaCl, 0.3mM EDTA, 160μg/ml BSA, 1mM DTT, 50%Glycerol，-20°C贮存。
ReactionBuffer
在TE缓冲液、PCR反应缓冲液、T4 DNA Ligase反应缓冲液等均有较高活性。
热失活
不能热失活。
质量控制
双链内切脱氧核糖核酸酶检测：50μl反应体系中，1μl酶和1μg pUC57，37℃孵育4h，0.8%琼脂糖凝胶检测。结果显示无切口或线性DNA存在，表明该产品通过此项测试。
内切及外切脱氧核糖核酸酶活性检测：20μl反应体系中，包含200ng双链的寡核苷酸，1 μl酶，37℃孵育4h，反应产物经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测并成像分析实验结果。结果显示寡核苷酸没有降解，表明该产品通过此项测试。
DNA 末端完整性和克隆效率污染活性的检测：将200ng pUC57酶切片段混合物（pUC57/HindⅢ，pUC57/PstⅠ，pUC57/SmaⅠ），1μl酶，37℃孵育4h，转化后进行蓝白斑筛选。白斑比例低于3%时，产品合格。
1.使用Taq DNA聚合酶和含尿嘧啶（U）的引物扩增目的DN**段。
2.按以下体系加：PCR样品：10μl
U Cutter酶：1μl
37°C酶切15～30min
3.反应体系加入约20ng线性化载体，该线性化载体末端具有与酶切后的PCR产物互补的突出粘末端。
4.室温放置15～30min。
5.取2～12μl转化至感受态细胞，涂平板，筛选。
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注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途