T4DNA连接酶
品牌 | 厂商性质 | 产地 | 货期 |
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概述
该酶催化契合的双链DNA或RNA的5´-磷酸末端和3´-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化平滑末端或粘性末端DNA之间的连接,还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA杂交双链中的单链切口,但对单链DNA或RNA无连接作用。
应用
1.TA克隆。
2.粘性末端和平齐末端均可连接。
3.限制性酶切片段的克隆。
4.将linker或adapter连接到DN**段的平齐末端。
来源
E.coli重组表达。
活性单位定义(Cohesive End Unit)
1CEU指在20μl 1×T4 DNA连接酶反应缓冲液中,在16℃反应条件下,30min能使50%的经Hind III 消化的λDN**段[5 端浓度为0.12μM(300μg/ml)]连接所需的酶量。
质量控制
双链内切脱氧核糖核酸酶检测:50μl反应体系中,1μl酶和1μg pUC57,37℃孵育4h,0.8%琼脂糖凝胶检测。结果显示无切口或线性DNA存在,表明该产品通过此项测试。
内切及外切脱氧核糖核酸酶活性检测:20μl反应体系中,包含200ng双链的寡核苷酸,1 μl酶,37℃孵育4h,反应产物经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测并成像分析实验结果。结果显示寡核苷酸没有降解,表明该产品通过此项测试。
DNA 末端完整性和克隆效率污染活性的检测:将200ng pUC57酶切片段混合物(pUC57/HindⅢ,pUC57/PstⅠ,pUC57/SmaⅠ),1μl酶,37℃孵育4h,转化后进行蓝白斑筛选。白斑比例低于3%时,产品合格。
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注:该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案,不可用于临床诊断或治疗等相关用途