其它生化试剂
Terminaldeoxynucleotidyltransferase
| 品牌 | 厂商性质 | 产地 | 货期 |
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产品介绍
概述
TdT（末端脱氧核苷酸转移酶，Terminal deoxynucleotidyl transferase 是一种无需模板的DNA聚合酶，催化脱氧核苷酸结合到DNA分子的3 羟基端，带有突出、凹陷或平滑末端的单、双链DNA分子均可作为TdT 的底物。
应用
1.催化DNA的3 末端添加同聚物。
2.利用修饰碱基（如ddNTP，DIG-dUTP）标记DNA 3 末端。
3.dUTP 缺口末端标记（细胞凋亡的原位检测）。
来源
大肠杆菌细胞，含有编码牛胸腺末端脱氧核苷酸转移酶的基因。
活性单位定义
一个单位是指在37℃、60min内将1nmol脱氧核糖核酸掺入多聚核苷酸片段（吸附在DE-81上）所需的酶量。
贮存条件
100 mMpotassium acetate (PH 6.8), 2 mM 2-mercaptoethanol, 0.01%(v/v)Triton X-100 and 50%(v/v) glycerol, -20°C贮存。
5×ReactionBuffer
1 Mpotassium cacodylate,125 mM Tris, 0.05% (v/v) Triton X-100, 5 mMCoCl2(PH 7.2 25°C)。
反应条件
1×ReactionBuffer，37℃温育。
活性抑制
抑制剂：金属螯合剂、铵、氯化物、碘化物和磷酸盐离子。
失活：加入EDTA，或70℃加热10min。
注意
由于含有CoCl2，TdT反应缓冲液不能与下游应用兼容，需采用柱离心法或苯酚/氯仿抽提及乙醇沉淀方法纯化反应混合物，除去CoCl2。
质量控制
1.双链内切脱氧核糖核酸酶检测：50μl反应体系中，1μl酶和1μg pUC57，37℃孵育4h，0.8%琼脂糖凝胶检测。结果显示无切口或线性DNA存在，表明该产品通过此项测试。
2.内切及外切脱氧核糖核酸酶活性检测：20μl反应体系中，包含200ng双链的寡核苷酸，1μl酶，37℃孵育4h，反应产物经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测并成像分析实验结果。结果显示寡核苷酸没有降解，表明该产品通过此项测试。
3.DNA 末端完整性和克隆效率污染活性的检测：将200ng pUC57酶切片段混合物（pUC57/HindⅢ，pUC57/PstⅠ，pUC57/SmaⅠ），1μl酶，37℃孵育40h，转化后进行蓝白斑筛选。白斑比例低于3%时，产品合格。
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注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途