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KlenowFragment

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产品介绍

概述
    Klenow Fragment是大肠杆菌DNA聚合酶I的大片段,具有5→3的DNA聚合酶活性和3’→5’外切酶校正活性,但失去了5→3外切核酸酶活性。
 
应用
    1.DNA平端化,5’突出段补平。
    2.随机引物探针的合成。
    3.第二链cDNA合成。
    4.Sanger方法DNA测序。

来源
    从带有编码DNA聚合酶I基因的E.coli polA菌株中提取,并利用基因重组技术,使用E.coli表达和纯化Klenow Fragment。

活性单位定义
    在37°C条件下,30min内能使10 nmol 的dNTP掺入酸不溶性物所需要的酶量定义为1个活性单位。
 
贮存条件
    25mMTris-HCl (PH 7.4),0.1mMEDTA,1mMDTT,  50%甘油, -20℃贮存。
 
10×反应缓冲液
    100mMTris-HCl(PH 7.9 25℃), 500mMNaCl ,100mMMgCl2 , 10mMDTT。反应时需要加入dNTP(不随酶提供)。

热失活
    75°C20min。
 
活性抑制剂
    金属离子螯合剂,无机焦磷酸盐(PPi),大剂量的无机磷酸盐(Pi)。
 
纯度
    考马斯蓝染色SDS-PAGE检测纯度大于90%,并无核酸内切酶、外切酶及RNase污染。
 
应用
    双链DNA 5’突出端(5’overhang)的补平
第一步:混合下面各种反应物:

DNA 0.1-4μg
10×反应缓冲液 2μl
dNTP Mix(2.5mMeach) 0.4μl
Klenow Fragment 0.5-1μl
无核酸酶的去离子水 补至20μl
第二步:按上表的体系轻轻混匀。
第三步:37℃孵育10min。
第四步:75℃孵育20min失活。    

KlenowFragment信息由深圳华因康基因科技有限公司为您提供,如您想了解更多关于KlenowFragment报价、型号、参数等信息,欢迎来电或留言咨询。

注:该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案,不可用于临床诊断或治疗等相关用途