18种氨基酸的测定

衍生化法分析18种氨基酸

一、  样品配制

以PITC-甲醇-三乙胺(1:8:1）为衍生剂；

#取710mg磷酸氢二钠加水溶解并稀释至1000ml，用10%磷酸-乙腈（95:5）溶液调pH至7.4，作为稀释液；

#精密称取18种氨基酸各10mg，置200ml量瓶中，加1ml三乙胺和20ml甲醇溶解后加水稀释至刻度，作为对照品储备液；

#分别取对照品储备液和样品各20μl，加入150μl甲醇，混匀，再加入20μl衍生剂，用旋涡震荡仪搅拌均匀，于室温放置20min，然后放入真空干燥箱干燥20min，得衍生产物，于衍生产物中分别加入300μl稀释液，用旋涡震荡仪搅拌均匀，即得对照和供试品溶液。

二、  分析条件

色谱柱: Kromasil 100-5-C18 (4.6*250mm, 5μm, PN：M05CLA25)

流动相：

流动相A: 19.0g三水醋酸钠、0.5ml三乙胺、0.2ml0.1%EDTA溶解于1000ml超净水中，充分混合，用冰醋酸水溶液调节PH值至6.40，以0.45um微孔滤膜过滤，取滤液940ml与60ml乙腈混合均匀

流动相B：量取600ml乙腈、400ml水、0.2ml 0.1%EDTA混合均匀

流速：1ml/min

柱温：30℃

波长：254nm

进样量：20μl

三、  实验结果

标样图谱:

样品图谱：