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18种氨基酸的测定

发布时间: 2021-02-20 17:20 来源:诺力昂 Kromasil

衍生化法分析18种氨基酸

 

一、  样品配制

以PITC-甲醇-三乙胺(1:8:1)为衍生剂;

#取710mg磷酸氢二钠加水溶解并稀释至1000ml,用10%磷酸-乙腈(95:5)溶液调pH至7.4,作为稀释液;

#精密称取18种氨基酸各10mg,置200ml量瓶中,加1ml三乙胺和20ml甲醇溶解后加水稀释至刻度,作为对照品储备液;

#分别取对照品储备液和样品各20μl,加入150μl甲醇,混匀,再加入20μl衍生剂,用旋涡震荡仪搅拌均匀,于室温放置20min,然后放入真空干燥箱干燥20min,得衍生产物,于衍生产物中分别加入300μl稀释液,用旋涡震荡仪搅拌均匀,即得对照和供试品溶液。

 

二、  分析条件

色谱柱: Kromasil 100-5-C18 (4.6*250mm, 5μm, PNM05CLA25)

流动相:

流动相A: 19.0g三水醋酸钠、0.5ml三乙胺、0.2ml0.1%EDTA溶解于1000ml超净水中,充分混合,用冰醋酸水溶液调节PH值至6.40,以0.45um微孔滤膜过滤,取滤液940ml与60ml乙腈混合均匀

流动相B:量取600ml乙腈、400ml水、0.2ml 0.1%EDTA混合均匀

 

时间/min

A/%

B/%

0

100

0

13

93

7

23

77

23

29

65

35

35

60

40

40

0

100

45

0

100

47

100

0

60

100

0

 

流速:1ml/min

柱温:30℃

波长:254nm

进样量:20μl

 

三、  实验结果

 

 

标样图谱:

11.jpg

样品图谱:

22.jpg


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