使用方法：
PE 抗体标记试剂盒适合标记抗体。我们不建议标记其他蛋白质，因为标记的 DOL（degree of labeling）可能达不到较好值。
检查你的抗体与抗体兼容性指南。如果你的一抗是商业产品，请联系供应商以获取抗体浓度和配方。不含稳定剂的抗体溶液可以得到较好的标记结果，而标准的标记步骤可以兼容低浓度的 Tris 和甘油，标记液不受 NaN3的影响。对于标准的标记步骤（B），根据需要标记的抗体的 μg 数量选择试剂盒的规格。去除非蛋白成分如 Tris、甘氨酸或甘油，可以用试剂盒中提供的超滤管来纯化您的抗体，步骤如下（A）。
标记效率较高的抗体浓度为 1 mg/mL。超滤管可用于浓缩抗体（或清洗抗体）。为定量未知浓度的抗体，UElandy 提供WonderOrange™ 蛋白质定量试剂盒（W6006），一种高度敏感性的蛋白质荧光定量测定试剂盒。如果不需要去除或浓缩抗体，则按照标准步骤（B）进行实验。

A. 超滤步骤
重要：在您开始之前，对照表 1（抗体兼容性和标记步骤选择指南）确定您的抗体在标记前是否需要超滤。如果有必要，联系抗体厂家了解抗体和抗体稳定剂的浓度。如果您的抗体不需要超滤，根据表 1 选择合适的标记步骤。超滤膜截留的分子量为 10 kDa，因此，小于 10 kDa 将可以通过膜，而分子大于 10 kDa 的，包括抗体，将保留在超滤管中（图 1）。注意不要用吸管触碰膜，这会撕裂或穿刺膜，导致抗体损失。
超滤管性能
最大样本体积：500 μL 最终浓缩体积：15-20 μL
滤液接收器体积：500 μL
滞留体积（膜/支持）：< 5 μL
1. 添加适量的抗体至超滤管中，小心不要触碰膜。14000 ×g 离心 2 min，使液体过滤进收集管，去除收集管中的液体。
2. 对于浓缩抗体，进行第 3 步。对于纯化抗体，加入等体积 1× PBS（PH 7.2）至超滤管中。14000 ×g 离心 2 min 使液体过滤进收集管，去除收集管中的液体。重复清洗 2-3 次。
3. 添加适当体积的 1× PBS（PH 7.2）至超滤管中，使得最终的抗体浓度为 1 mg/mL，小心吹吸 PBS 以重悬抗体。
4. 将上述超滤管倒放入新的收集管中，1000 ×g 离心 2 min，将收集管中的抗体转移至干净的 EP 管中。

B. 标准的标记步骤
重要：在您开始之前，对照表 1（抗体兼容性和标记步骤选择指南）确定您的抗体组成和浓度是否适用于该试剂盒标记，以及哪种标记步骤适合您选择。如果有必要，联系抗体厂家了解您的抗体和抗体稳定剂的浓度。
1. 抗体浓度 1 mg/mL 是较合适的标记浓度。如果抗体是冻干形式或浓度更浓，用 1× PBS（PH 7.2）溶解或稀释抗体。将需要标记的抗体转移到干净的管子里。确保待标记的抗体量匹配试剂盒的标记范围。
2. 将 Linking Reagent 恢复室温。短暂离心试剂管将粉末集中到底部。
3. 将抗体（1 mg / mL）转移至含有 Linking Reagent 的管中，溶解混匀，室温（20-25℃）摇晃反应 1h。
4. 将上步的溶液全部转移至超滤管中，加入 200 μL 1× PBS（PH 7.2），14000 ×g 离心 2 min。抗体将残留在超滤管中，丢弃收集管中的液体。
5. 重复清洗一次。
6. 将上述超滤管倒放入新的收集管中，1000 ×g 离心 2 min，向收集管中加入适量的 1×PBS（PH 7.2），根据添加到反应中的抗体量，将抗体重新悬浮到最终浓度为 1 mg/mL。
7. 将收集管中的抗体转移至含有 Modified PE 的管中溶解混匀。室温（20-25℃）避光摇晃孵育 4h。
8. 向上步反应溶液中加入 1/10 体积的 Storage Buffer，涡旋混匀，室温（20-25℃）避光摇晃孵育 1h。
9. 修饰好的抗体可直接用于染色，如需-20℃保存，则需另加入等体积甘油。