琥珀酸脱氢酶检测试剂盒，100T/96S

中文名：琥珀酸脱氢酶检测试剂盒

英文名：Succinate Dehydrogenase Assay Kit

英文别名：SDH Activity Assay Kit

纯度：100T/96S

货号：S486202

存储温度：-20°C储存

产品介绍：

SDH（EC 1.3.5.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。SDH是线粒体的一种标志酶，位于线粒体
内膜上的一种膜结合酶，是连接呼吸电子传递和氧化磷酸化的枢纽之一。此外，为多种原核细胞产能的呼吸链提供电子。
SDH催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸，脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸（PMS）传递还原2,6-二氯酚靛酚（DCPIP），并且在600nm处具有特征吸收峰，通过600nm吸光度的变化，测定2,6-DCPIP的还原速度，代表SDH酶活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

产品组成

需自备的仪器和用品： 

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰 和蒸馏水。

操作步骤：

 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 

1. 组织样本：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一和 10μL 试剂二，用冰浴匀浆器或研钵匀浆充分研磨，4℃ 11000g 离心 10min，取上清，置冰上待测。 

2. 细胞或者细菌样本：先收集 500 万细菌/细胞到离心管内，离心后弃上清；之后加入 1mL 试剂一和 10μL 试剂 二，冰浴超声波破碎细菌（功率 200W，超声 3s，间隔 7s，总时间 5min）；然后 11000g，4℃，离心 10 min， 取上清置于冰上待测。

二、测定步骤 

1、 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至600nm，分光光度计蒸馏水调零。 

2、 样本测定

将试剂三和试剂四依次加入到 1.5mLEP 管中，37℃(哺乳动物)或 25℃（其它物种）保温 10min 后加入到微量 比色皿或 96 孔板再按表格依次加入各试剂，在 600nm 波长下记录 20s 时的初始吸光度 A1 和 1min20s 时的吸光度 A2，计算 ΔA=A1-A2，得到 ΔA 测定、ΔA 空白。空白管只需测 1-2 次。 

三、SDH 活性的计算 

a.用微量比色皿测定的计算公式如下

（1）按样本蛋白浓度计算 单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟消耗1nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。 

SDH活性（U/mg prot）=[（ΔA测定-ΔA空白）÷（ε×d）×V反总×109 ]÷(Cpr×V样) ÷T =952.381×（ΔA测定-ΔA空白）÷Cp  

（2）按样本质量计算 单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟消耗1nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。 

SDH活性（U/g 质量）=[（ΔA测定-ΔA空白）÷（ε×d）×V反总×109]÷(V样÷V样总×W) ÷T =961.905×（ΔA测定-ΔA空白）÷W 

（3）按细菌或细胞数量计算 单位的定义：每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟消耗1nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。 

SDH活性（U/104 cell）=[（ΔA测定-ΔA空白）÷（ε×d）×V反总×109 ]÷(V样÷V样总×500) ÷T =1.924×（ΔA测定-ΔA空白）

  V反总：反应体系总体积，2×10-4 L；ε：2,6-二氯吲哚酚摩尔消光系数，2.1×104L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm； V样：加入样本体积，0.01mL；V样总：加入试剂一和试剂二体积，1.01mL；T：反应时间，1min；Cpr：样本蛋 白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万；109 ：单位换算系数，1mol=109nmol。 

b.用96孔板测定的计算公式如下

（1）按样本蛋白浓度计算 单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟消耗1nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。 

DH活性（U/mg prot）=[（ΔA测定-ΔA空白）÷（ε×d）×V反总×109]÷(Cpr×V样) ÷T =1587.302×（ΔA测定-ΔA空白）÷Cpr  

（2）按样本质量计算 单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟消耗1nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。 

SDH活性（U/g 质量）=[（ΔA测定-ΔA空白）÷（ε×d）×V反总×109 ]÷(V样÷V样总×W) ÷T =1603.175×（ΔA测定-ΔA空白）÷W

（3）按细菌或细胞数量计算 单位的定义：每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟消耗1nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。

SDH活性（U/104 cell）=[（ΔA测定-ΔA空白）÷(ε×d)×V反总×109 ]÷(V样÷V样总×500)÷T =3.207×（ΔA测定-ΔA空白）  

V反总：反应体系总体积，2×10-4 L；ε：2,6-二氯吲哚酚摩尔消光系数，2.1×104L/mol/cm；d：96孔板光径，0.6cm； V样：加入样本体积，0.01mL；V样总：加入试剂一和试剂二体积，1.01mL；T：反应时间，1min；Cpr：样本蛋 白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万；109 ：单位换算系数，1mol=109nmol。 

注意事项：

1、 测定过程中所有试剂和样本在冰上放置，以免变性失活。 

2、 若ΔA大于0.5（比色皿）/0.3（96孔板），需将酶液用酶提取液稀释，使ΔA小于0.5/0.3，可提高检测灵敏度。 注意同步修改计算公式。

3、 由于提取液中含有一定浓度的蛋白（约1mg/mL），所以在测定样品蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量。

实验实例： 

1、 取 0.1g 肾脏加入 1mL 试剂一和 10μL 试剂二，用冰浴匀浆器匀浆充分研磨，4℃11000g 离心 10min，取上清置 冰上。按照测定步骤操作，用微量石英比色皿测得计算 ΔA 测定=A1 测定-A2 测定=0.7838-0.6414=0.1424，ΔA 空白=A1 空白-A2 空白=1.019-1.019=0，按样本质量计算酶活得： 

SDH 活性（U/g 质量）=961.905×（ΔA 测定-ΔA 空白）÷W=1369.75 U/g 质量。

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