miRNA小量制备试剂盒

中文名：miRNA小量制备试剂盒

英文名：miRNA miniprep Kit

货号：M598102

存储温度：室温

产品介绍：

本试剂盒用于从各种动物组织、植物组织和细胞中提取miRNA。提取的miRNA 分子完整、纯度高，适用于Northern Blot 、Real-TimePCR、miRNA微列阵芯片、原位杂交、RNase保护测定等各种分子生物学实验

组分：

应用范围：

核酸提取及纯化

使用方法：
一、实验准备：
1.所有试剂用DEPC处理过的溶剂配制。请选用RNase-free枪头和离心管，以避免提取过程中RNA被RNase降解。
2.70%乙醇,- 20C预冷。
二、操作步骤：
不同的样品提取miRNA的操作中略有区别，具体步骤分述如下：
【从动物组织中提取miRNA】
1.取20-40 mg组织，转移至预冷的研钵中，加液氮研磨成粉末。
请按下面说明使用组织的量：
①RNA丰富的组织(如肝脏)：不超过30 mg
②RNA含量低的组织(如肌肉)：不超过100 mg
③当使用的组织量小于20 mg时：R-I，R- II和异丙醇的使用量都减半
④当使用的组织量大于40 mg时：R-I，R-II和异丙醇的使用量按比例增加
2.加入400 ul Buffer R- I，用装有21-25号针头的注射器反复抽吸8-10次，转入1.5 m|离心管(试剂盒内提供)中。
3.加入150 μl BufferR-1l,漩涡振荡15-30 s，12,000X g离心5 min。【建议在4℃下离心】
4.取上清至1.5 ml离心管中，加入180 u无水乙醇，混和均匀。
5.将制备管置于2 m|离心管(试剂盒内提供)中，转移步骤4中的混合液到制备管中，12,000X g离心1 min。【①建议在4℃下离心；②miRNA在滤液中，注意保存滤液。】
6.弃制备管，在滤液中加入500 μl异丙醇，混和均匀。
7.12,000X g离心10 min,弃上清。
8.加入700 μl 70%乙醇( - 20℃预冷)，12,000Xg离心5min.
9.弃上清,室温干燥5- 10 min。
10.离心管中加入70 ul Buffer TE (nucdease-free) 或RNase-free水洗脱miRNA。
【从植物组织中提取miRNA】
1.取30-150 mg组织，转移至预冷的研钵中，加液氮研磨成粉末。
请按下面说明使用组织的量：
①植物叶子：通常用量10-80 mg
②植物纤维组织：通常用量100-150 mg
③当植物叶组织量小于30 mg时：R-I，R-II和异丙醉的使用量都减半
④当植物叶组织量大于80 mg时：R-I，R-II 和异丙醇的使用量按比例增加
⑤当植物纤维组织量大于150 mg时：R-I，R- II和异丙醇的使用量按比例增加
2.加入400 ul BufferR- I，用装有21-25号针头的注射器反复抽吸8-10次，转入1.5 mI离心管( 试剂盒内提供)中。.
3.加入150 ul Buffer R-1I,漩涡振荡15-30 s, 12.000x g离心5 min。【 建议在4℃下离心】
4.取上清至1.5 ml离心管中，加入180 山无水乙醇，混和均匀。
5.将制备管置于2 mI离心管(试剂盒内提供)中，转移步骤4中的混合液到制备管中，12.000xg离心1 min.【①建议在4℃下离心；②miRNA在滤液中，注意保存滤液。】
6.弃制备管，在滤液中加入500 μl异丙醇，混和均匀。
7. 12,000xg高心10 min,弃上清。
8.加入700 ul 70%乙醇( - 20℃预冷)，12,000xg离心5min.
9.弃上清,室温干燥5 -10 min,
10.离心管中加入70 μl Buffer TE (nuclease-free) 或RNase-free水洗脱MiRNA。

【从细胞中提取miRNA】
步骤1-3根据细胞培养的方式不同可以选择a或b两种实验方法
a.悬浮培养的动物细胞或从培养皿、培养瓶中获得的细胞悬浮液或新鲜分离的动物组织单细胞悬浮液:
1a.收集2X 10*-1X 10’的细胞，2,000Xg离心5 min，弃上清；
2a.加入400 μl BufferR- I，用装有21-25号针头的注射器反复抽吸8-10次，转入1.5mI离心管(试剂盒内提供)中；
3a. 加入150 μl Buffer R1I，旋涡振荡15-30s，12.000X g离心5 min.【建设在4℃下离心】。
b. 96-孔L, 24-孔,12-孔或6-孔培养板上贴壁培养的细胞:
1b.从96-孔， 24-孔，12-孔或6-孔培 养板里收集细胞，尽量弃去培养基，每孔加入400 u山l Buffer R-I，用移液枪上下吹打8-10次；
2b.转移上述细胞悬浮液到1.5 ml离心管( 试剂盒内提供)中，用装有21-25号针头的注射器反复抽吸8-10次；
3b. 加入150 μl Bufflr R-II， 漩涡振荡15-30 s， 12,000X g离心5 min.【建议在4℃下离心】
4.取上清至1.5 ml离心管中，加入180 山无水乙醇，混和均匀。
5.将制备管置于2 ml离心管(试剂盒内提供)中，转移步骤4中的混合液到制备管中，12.000Xg离心1 min。【①建议在4℃下离心；②miRNA在滤液中，注意保存滤液。】
6.弃制备管，在滤液中加入500 u异丙醇，混和均匀。
7.12,000Xg高心10 min,弃上清。
8.加入700 μ 70%乙醇( - 20℃预冷)，12,000xg离心5min.
9.弃上清,室温干燥5 -10 min.
10.离心管中加入70 ul Bufer TE (nucdease-free )或RNase-free水洗脱mRNA。
三、流程图

注意事项：

Buffer R- I含刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套和眼镜，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，谨防吸入口鼻。若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医疗咨询。

查看阿拉丁官网此产品相关对应页面：https://www.aladdin-e.com/zh_cn/M598102.html

miRNA小量制备试剂盒信息由上海阿拉丁生化科技股份有限公司为您提供，如您想了解更多关于miRNA小量制备试剂盒报价、型号、参数等信息，欢迎来电或留言咨询。

注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途