质粒 DNA 小量抽提试剂盒

本试剂盒采用改进的 SDS 碱裂解法，结合 DNA 磁珠选择性吸附 DNA 的方法，达到快速纯化质粒 DNA 的目的。适合从 1-4mL 细菌培养物中提取多至 20μg 高纯度的质粒 DNA，用于测序、体外转录与翻译、 限制性内切酶消化、细菌转化等分子生物学实验。

产品简介

本试剂盒采用改进的 SDS 碱裂解法，结合 DNA 磁珠选择性吸附 DNA 的方法，达到快速纯化质粒 DNA的目的。适合从 1-4mL 细菌培养物中提取多至 20μg 高纯度的质粒 DNA，用于测序、体外转录与翻译、
限制性内切酶消化、细菌转化等分子生物学实验。

产品信息

Rnase A： 50 mg/mL ,室温保存。
Buffer S1：细菌悬浮液。加入 Rnase A 后，4℃保存。
Buffer S2：细菌裂解液，室温密闭储存。若出现沉淀，应于 37℃温浴溶解并冷却至室温后再使用。
Buffer N3：中和液，室温密闭储存。 Beads: 磁珠溶液，4℃储存。
Elutent：2.5 mM Tris-HCl, pH 8.5，室温密封储存。

操作流程

使用前准备

70% 乙醇
第一次使用前，RNase A 全部加入 Buffer S1 中，4℃储存准备无核酸和核酸酶污染的 Tip 头等耗材
异丙醇
磁性分离器：可选用海狸磁性分离器，Cat.60201

操作流程

1.第一次使用前，RNase A全部加入Buffer S1中，4℃储存。

2.取1-4mL在LB培养基中培养过夜的菌液（若使用丰富的培养基，菌液体积应减半或更少），12000×g离心1min，弃上清。

3.用100μL已加入RNase A的Buffer S1悬浮细菌沉淀，悬浮需均匀，不应留有小的菌块。

4.加入100 μLBuffer S2，温和并充分地上下翻转混合4-6次均匀使菌体充分裂解，直至形成透亮的溶液，此步骤不宜超过5min。

5.加入140μL Buffer N3，温和并充分地上下翻转混合6-8次， 12000×g离心10min。

6.吸取125μL步骤5中的离心上清于一新的1.5mL离心管中。

7.加入40 μL Beads和60 μL的异丙醇，用枪头吹打3-5次。

表1：转移不同上清液量和对应Beads和异丙醇体积用量

a）Beads易沉淀，使用前应摇匀，使Beads充分混匀

b）根据上清体积调整异丙醇的比例

8.室温放置5min,放置过程中，用枪头吹打混合2-3次。

9.将反应管置于磁力架上静置30s，直至磁珠完全吸附至管壁，上清清澈后，吸弃液体。
a）注意勿将磁珠吸出
b）弃液体后，勿将反应管从磁力架上取出

10.加入200μL70%乙醇，在室温下放置30s，吸弃液体。重复操作1次。
a）注意勿将磁珠吸出
b）注意在磁力架上操作，勿从磁力架上取出反应管c）请务必吸尽反应管内残留的液体

11.让磁珠在室温下干燥3-5min.
a）注意在磁力架上操作，勿从磁力架上取出反应管b）在室温下翻转取出残留的乙醇
c）勿使磁珠过分干燥，否则将影响DNA得率

12.移去磁力架，加入60-100μL Eluent或去离子水，用移液器吸头轻轻吹打管壁磁珠，直至分布均匀，静置2min。

13.将反应管置于磁力架上，静置直至磁珠全部吸附至管壁，吸取上清至一新的离心管中，即得高纯度的 DNA。

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注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途