介绍： Calcein, AM 是一种可对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂，它穿透细胞膜进入细胞后被细胞内 的酯酶剪切形成 Calcein，从而被滞留在细胞内，发出强绿色荧光。与其它同类试剂（如 BCECF, AM 和 CFDA）相比，Calcein, AM 的细胞毒性很低。Calcein 的激发和发射波长分别为 490 nm 和 515 nm。

Calcein, AM 仅对活细胞染色。作为核染色染料的 PI 不能穿过活细胞的细胞膜，它穿过死细胞膜的 无序区域而到达细胞核， 并嵌入细胞的 DNA 双螺旋从而产生红色荧光 （激发： 535 nm， 发射： 617 nm） ， 因此 PI 仅对死细胞染色。由于 Calcein 和 PI‐DNA 都可被 490 nm 激发，因此可用荧光显微镜同时观察活 细胞和死细胞。用 545 nm 激发，仅可观察到死细胞。根据以上特点，Calcein, AM 和 PI 经常被结合用来 作为活细胞和死细胞的双重染色。

由于不同细胞系的最佳染色条件不同，我们建议个别确定 Calcein, AM 和 PI 的合适浓度。

使用方法：

（1）用 DMSO 制备 1 mM 的 Calcein, AM 溶液，并用 PBS 将其稀释制成 1～50 μM 的 Calcein, AM 溶液。

（2）将 1/10 细胞培养基体积的 Calcein, AM 溶液加入到细胞培养基中。 b)

（3）在 37℃培养细胞 15～30 分钟。

（4）用 PBS 或适当的缓冲液洗涤细胞两次。

（5）用 490 nm 激发波长，515 nm 发射波长的滤光片的荧光显微镜观察细胞。

a)  如果 Calcein, AM 很难进入细胞，可以使用表面活性剂，如 Pluronic F127。

b)  也可以用 1/10 浓度的 Calcein, AM 溶液代替培养基。

敏感性： 对光敏感

储存条件： -20℃

用途： A non-fluorescent, membrane permeable probe that can be hydrolyzed to a fluorescent molecule