miScript Plant RT Kit试剂盒

miScript Plant RT Kit试剂盒用于植物miRNA和其他3'端修饰的小RNA的cDNA合成

• 可针对3'端甲基化（2'-O-Me）修饰的小RNA进行通用型cDNA合成 

• 可凭借单一cDNA合成反应进行成熟植物miRNA表达谱分析

• 可凭借单一cDNA合成反应进行piRNA的表达谱分析

miScript Plant RT Kit是针对具有3’端甲基化(2'-O-Me)修饰的小RNA进行无偏差 cDNA合成的通用型试剂盒。本试剂盒专为基于实时定量PCR技术的小RNA表达分析应用设计和优化，能够配合miScript SYBR Green PCR Kit和miScript miRNA PCR Array或miScript Primer Assay等产品使用。这一类通过功能验证的分析和芯片产品可应用于水稻、玉米、大豆、烟草和其他一些重要农业作物的检测，以及植物学相关的研究。在3’末端碱基具有2'-O-Me甲基化修饰的小RNA（如植物成熟miRNA和piwi互作RNA (piRNA)）中，一般不具有poly A尾结构，因此无法通过多聚腺苷酸依赖的cDNA合成方法有效地反转录。专用的miScript Plant RT Kit通过首先向植物miRNA的3'末端连接一个接头解决了这一难题。不同于多聚腺苷酸化，这一链接反应不会受到植物miRNA 3'末端碱基上存在的2'-O-Me甲基化修饰的负面抑制。接头一旦连接成功，即可实现反转录反应。

性能

miScript Plant RT Kit与miScript Plant qPCR System的联合使用，能够确保针对植物样本实现灵敏和特异性的miRNA检测和定量工作。由于许多miRNA表达丰度很低，因此检测灵敏度对于确保获得可靠数据至关重要。miScript Plant qPCR System能够提供优异的灵敏度，宽广的动态监测范围，以及始终如一的高扩增效率。miScript Plant qPCR System的良好性能将帮助您于首次尝试时，即在技术重复和生物重复样本之间获得高度可重复的结果。

原理

成熟的miRNA一般是长度为22个碱基的非编码RNA，能够介导转录后的基因调控。植物的miRNA和piRNA会在其3'末端碱基上形成2'-O-Me形式的甲基化修饰。因此，植物miRNA和piRNA的通用cDNA合成，需要通过连接反应来实现后续的反转录反应。

连接反应介导的反转录

miScript Plant RT Kit包含了针对植物成熟miRNA样本进行连接反应介导的通用型反转录所需的全部试剂；这些试剂包括10x miScript Ligation Buffer，10x miScript Plant Adaptor，2x miScript Ligation Activator，miScript Plant RNA Ligase，10x miScript Plant RT Nucleics，5x miScript Plant RT Buffer以及miScript Plant Reverse Transcriptase。进行连接反应介导的反转录时，小RNA被选择性地转换为cDNA。在反应的成熟的miRNA与一个接头相连接。在反应的第二步，连接好的miRNA被反转录为cDNA。

10x miScript Plant Adaptor包含了一个经过优化的预腺苷化接头，及一个人工合成的对照RNA（miScript Plant Ligation Control [miPLC]），后者被用于评估连接反应介导的反转录的反应性能。10x miScript Plant RT Nucleics包含了dNTPs、RT引物和一个合成的RNA-DNA杂交内参（miScript Plant Reverse-Transcription Control [miPRC]），后者也被用于检测反转录的反应性能，能够促进成熟miRNA向cDNA的选择性转化，从而实现后续使用miScript miRNA PCR Array或miScript Primer Assay的miRNA定量操作。  

通过real-time PCR进行miRNA的表达谱分析

使用miScript miRNA PCR Array（其中包含针对特定miRNA的miScript Primer Assay）和miScript SYBR Green Kit（其中包含miScript Universal Primer（反转录引物）和QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix）进行real-time PCR分析时，可采用miScript Plant RT Kit制备的cDNA做为模板。需要鉴定成熟miRNA的表达谱时，可向miScript miRNA PCR Array中加入含有cDNA、miScript Universal Primer、QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix和去RNA酶水的混合物。

通过real-time PCR进行miRNA表达水平的定量

使用植物的miScript Primer Assay和miScript SYBR Green Kit产品进行Real-time PCR分析时，使用miScript Plant RT Kit制备的cDNA可做为模板。需要对成熟miRNA的表达水平进行定量时，可制备含有cDNA、miScript Primer Assay、miScript Universal Primer、QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix和去RNA酶水的混合物，并加入到PCR反应管、Rotor-Disc或平板中。

操作流程

反转录反应可方便地进行。通常在连接反应介导的反转录反应中，一般使用含有3’端2'-O-Me修饰小RNA的总RNA做为起始材料。反转录是一个简单直接的操作步骤，包含了37℃下1小时的温育反应，以及之后在95℃下通过短暂孵育对反应进行失活。

应用

miScript Plant RT Kit通常做为miScript Plant PCR System的一部分，用于进行： 

• 植物成熟miRNA的定量和表达谱分析

• piRNA的定量和表达谱分析

• miScript Plant RT Kit试剂盒

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注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途