概述
TaqDNA Polymerase是一种热稳定的DNA聚合酶，来源于嗜热细菌Thermus aquaticus。该酶具有5′-3′DNA聚合酶活性，还具有较低的5′-3′ 核酸外切酶活性，没有3′-5′的外切酶活性，在PCR产物的3′ 末端会加一个“A”，可用于TA克隆。
应用
1.常规PCR扩增反应，可扩增长达6kb的DN**段，通常适合扩增长度3kb以下的片段。
2.平端PCR产物3′ 末端加“A”。
3.DNA测序。
4.DNA3′ 末端标记。
来源
来源于Thermus aquaticusYT1的TaqDNA Polymerase基因的重组E. coli菌株。
活性单位定义
1单位（U）TaqDNA Polymerase活力定义为在72℃条件下，30min内，以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，催化掺入10nmol 脱氧核苷酸成为酸不溶性物质所需的酶量。
贮存条件
20 mMTris-HCl (pH8.0)，100 mMKCl，0.1 mMEDTA，0.1 % NP-40 (v/v)，0.1 % Tween-20 (v/v)，1 mMDTT，50 %甘油（v/v），-20°C贮存。
10×TaqBuffer（with Mg2+）
100 mM Tris-HCl (PH 8.8)
500 mMKCl
15 mMMgCl2
1% Triton X-100
常规PCR反应条件
一.室温融化反应所需溶液后混匀并短暂离心至管底，连同TaqDNA聚合酶一起置于冰上。
二.按如下PCR反应体系（50μl）混合各溶液：
| Template DNA | ×μl |
| ForwardPrimer（10 μM） | 1 μl |
| ReversePrimer（10 μM） | 1 μl |
| dNTP Mixture（10 mMeach） | 1 μl |
| 10×Taq Buffer（with Mg2+） | 5 μl |
| TaqDNA Polymerase（5U/μl） | 0.25 μl |
| 灭菌ddH2O | up to 50 μl |
注①：50μl PCR反应体系中模板DNA推荐使用量： | 人类基因组DNA | 50~500ng |
| 大肠杆菌基因组DNA | 5~50ng |
| λDNA | 0.5~10ng |
| 质粒DNA | 0.1~5ng |
②：可以使用不含Mg2+的反应buffer,并根据需要自行添加MgCl2达到Mg2+ 的最适反应浓度。
三.轻轻混匀反应液并短暂离心至管底，如果PCR仪没有热盖可加入一半体积的矿物油。
四.将PCR管放入PCR仪中，设置并运行PCR反应条件如下： | 步骤 | 温度 | 时间 | 循环次数 |
| 预变性 | 94℃ | 3~5min | 1 |
| 变性 | 94℃ | 30s | 25~35 |
| 退火 | Tm-5℃ | 30s |
| 延伸 | 72℃ | 1min/kb |
| 最后延伸 | 72℃ | 5~15min | 1 |
注：PCR反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异，在具体操作中需要根据模板类型、目的片段大小、扩增片段的碱基序列和引物的GC含量及长短等具体情况来设计最佳的反应条件，包括退火温度，延伸时间等。
质量控制 纯度检测：经SDS-PAGE检测纯度大于95%。
核酸内切酶检测：10U Taq DNA聚合酶与500ng λDNA在1×Taq buffer中37℃共同孵育16h，0.8%琼脂糖电泳检测，DNA没有出现降解和被切断表示通过该项检测。
核酸外切酶检测：10U Taq DNA聚合酶与200ng 50 bp ssDNA在1×Taq buffer中37℃共同孵育16h，15%变性PAGE胶电泳检测，DNA没有出现降解，表示通过该项检测。
大肠杆菌DNA污染检测：
PCR 产物：544 bp
Forward primer：5-GGAAGAAGCTTGCTTCTTTGCTGAC-3
Reverse primer：5-AGCCCGGGGATTTCACATCTGACTTA-3
PCR程序：94°C, 3 min; 35 cycles( 94°C, 30 sec; 55°C, 30 sec; 72°C, 45 sec); 72°C, 7 min
0.8%琼脂糖电泳检测没有544bp产物出现，表明通过该项检测。
质粒污染检测：
T7 Promoter Primer：5’-TAATACGACTCACTATAGGGAGA-3
T7 terminator Primer：5’-TATGCTAGTTATTGCTCAG-3
PCR程序：94°C, 3 min; 35 cycles( 94°C, 30 sec; 55°C, 30 sec; 72°C, 45 sec); 72°C, 7 min
0.8%琼脂糖电泳检测没有PCR产物条带出现，表明通过该项检测。
支原体污染检测：
PCR产物:：717 bp
GPO-1 ：5’-ACTCCTACGGGAGGCAGCAGTA-3
MGSO ：5’-TGCACCATCTGTCACTCTGTTAACCTC-3
PCR程序:：94°C, 3 min; 35 cycles( 94°C, 30 sec; 55°C, 30 sec; 72°C, 45 sec); 72°C, 7 min
0.8%琼脂糖电泳检测没有PCR产物条带出现，表明通过该项检测。
