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快速碱性磷酸酶
品牌 | 厂商性质 | 产地 | 货期 |
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阿拉丁 | 总代理 | 中国 | 现货 |
性能特点
产品组成 货号 组分 规格 A397978A-1000U Alkaline Phosphatase (Fast)(1 U/μl) 1000U A397978B-2×1ml 10×AP Buff
货号 | 规格 | 价格 | 操作 |
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A397978-1kit | 1kit | ¥2,266.90 | 询底价 |
中文名:快速碱性磷酸酶
英文名:Alkaline Phosphatase (Fast)
货号:A397978
存储温度:-20°C储存
产品介绍:
产品组成
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产品简介
Alkaline Phosphatase (Fast) 可催化 DNA、RNA 以及核苷酸 5' 端和 3' 端磷酸基团的水解,也能够去除蛋白磷酸基团,但不能催化磷酸二脂及磷酸三脂的水解。在 37℃的条件下作用 10 分钟,该酶即可使所有类型 DNA 的末端去磷酸化。由于该酶在 CutOne™ 酶切 Buffer 中具有 100% 活性,且失活条件为 80℃温育 20 分钟,因此与 LightiNing™ 快速内切酶 进行“酶切 - 去磷酸化”反应时,可在同管内完成,大大简化了实验流程。
酶活单位定义
37℃条件下, Alkaline Phosphatase 缓冲液环境中,10 min 内能够将 1 μg 线性化 pUC57 DNA 的 5' 末端去磷酸化所需要的酶量定义为 1 个 活性单位(U)。
质量控制
核酸内切酶残留检测:将酶液与超螺旋质粒 DNA 在 37℃温育 4 h,通过 DNA 电泳检测质粒无变化。
核酸外切酶残留检测:将酶液与双链 DNA 底物在 37℃温育 16 h,通过 DNA 电泳检测双链 DNA 底物无变化。
宿主检测:将酶液中残留的核酸经 E.coli 16S rDNA 特异性的 Taq Man qPCR 检测,E.coli 基因组残留低于 10 拷贝。
使用方法
1. 质粒载体线性化与去磷酸化同步反应流程
① 于冰上配制如下反应体系:
a. 为了保证去磷酸化的效率,质粒 DNA 应不含 RNA 和基因组 DNA 污染。
② 充分混匀并瞬离,37℃温育 15~30 min。 注:如果延长温育时间,可能产生星号活性。
③ 80℃温育 20 min,以终止反应。
2. 核苷酸去磷酸化的实验流程
该方案适用于去除 DNA 的 3' 和 5' 端磷酸基团。
① 于冰上配制如下反应体系:
② 充分混匀并瞬离,37℃温育 10 min。
③ 80℃温育 20 min,以终止反应。
3. 蛋白质去磷酸基团的实验流程
① 于冰上配制如下反应体系:
② 充分混匀并瞬离,37℃温育 1 h;
③ 添加 EDTA 至 50 mM 的终浓度,或者添加钒酸钠(Na3VO4)至 10 mM 的终浓度,以终止反应。 注:以上为蛋白质去磷酸基团的反应体系和实验流程的举例,实验时请根据具体底物类型调整 Alkaline Phosphatase 的使用量以及最佳温育时间。
注意事项
与 Alkaline Phosphatase 结合的 DNA 在琼脂糖凝胶中可能会出现条带偏移或弥散,为避免此现象,可在样品中加入混有 SDS 的 6× Loading Buffer,先在 80℃温育 20 min,冰浴降温后再进行电泳。
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