快速内切酶NcoI

中文名：快速内切酶NcoI

英文名：LightNing™ NcoI

货号：L397482

存储温度：-20°C储存

产品介绍：

产品组成

产品简介

LightNing™ 快速内切酶是一系列经过基因工程重组、能够在 5~15 分钟内精确完成 DNA 切割的限制性内切酶，适用于质粒 DNA、 PCR 产物或基因组 DNA 等的快速酶切。LightNing™ 快速内切酶具有如下特点：5~15 分钟内即可完成酶切；共用一种酶切 Buffer，大大简化酶切反应体系；良好的酶活冗余度，轻松应对底物过量或困难模板酶切。此外，去磷酸化、连接试剂在 CutOne™ 酶切 Buffer 中具有 100% 活性，支持一管化反应，提升“酶切 - 修饰 - 连接” 的体验。

建议的反应条件

1× CutOne™ 缓冲液；

37℃温育；

参照“DNA 快速酶切流程”配制反应体系。

失活条件

80℃温育 20 min。

质量控制

功能活性检测：最适反应温度下，在 20 μl 反应体系中，1 μl LightNing™ NcoI 能够在 15 min 内完全消化 1 μg λDNA。

超长时间温育检测：最适反应温度下，将 1 μl LightNing™ NcoI 与 1 μg λDNA 共温育 3 h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解，延时酶切可能出现星号活性。

酶切 - 连接 - 再酶切检测：最适反应温度下，使用 1 μl LightNing™ NcoI 消化底物，回收酶切产物。在 22℃下使用适量 Fast T4 DNA Ligase 可以将酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。

非特异性内切酶活性检测：使最适反应温度下，将 1 μl LightNing™ NcoI 与 1 μg 超螺旋质粒 DNA 共同温育 4 h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，质粒 DNA 仍然处于超螺旋状态。 蓝白斑检测：将含有单一 lacZα 基因的载体以 1 μl LightNing™ NcoI 消化，重新连接后转化入大肠杆菌感受态细胞，涂布在含有对应抗生素、IPTG 和 X-gal 的 LB 培养基平板上。连接正确的产物会生长出蓝色菌落， 而连接错误（即 DNA 末端切口不完整）的产物将得到白色菌落。对 于 LightNing™ 系列限制酶而言，白色菌落比例应小于 1%。

使用方法

1. DNA 快速酶切流程

① 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：

a. 本体系适用于经过纯化的 PCR 产物酶切。未纯化的 PCR 产物具备一定的离子强度，10× CutOne™ Buffer 加入量可适当减少至 2 μl。但由于 DNA 聚合酶同时具有外切酶活性，会影响酶切产物，因此如下一步需进行克隆等操作，建议酶切前对 PCR 产物进行纯化。

② 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；

③ 37℃温育 15 min（质粒），或 15~30 min（PCR 产物），或 30~60 min（基因组 DNA）；

④ 80℃温育 20 min 即可使酶失活，停止反应（可选）。

2. 双酶切或多酶切

① 每种快速内切酶的用量为 1 μl，并根据需要适当扩大反应体系；

② 所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的 1/10；

③ 如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，在其最适反应温度下进行酶切反应。

3. 适用于质粒的扩大反应体系

注：如果总反应体系大于 20 μl，应适当增加温育时间，尽量使用水浴、金属浴或沙浴。

不同 DNA 中的酶切位点数量

甲基化修饰影响

在不同反应缓冲液中的活性

查看阿拉丁官网此产品相关对应页面：https://www.aladdin-e.com/zh_cn/L397482.html

快速内切酶NcoI信息由上海阿拉丁生化科技股份有限公司为您提供，如您想了解更多关于快速内切酶NcoI报价、型号、参数等信息，欢迎来电或留言咨询。

注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途