采用实时荧光PCR技术，针对梭菌特异性基因设计引物和探针。PCR扩增过程中，与模板结合的探针被Taq酶分解产生荧光信号，荧光定量PCR仪根据检测到的荧光信号绘制出实时扩增曲线，从而实现梭菌在核酸水平上的菌种鉴定。本产品可以鉴定丁酸梭菌、产气荚膜梭菌、新生儿梭菌、艰难梭菌、生孢梭菌、肉毒梭菌、巴氏梭菌等菌株，同时可以鉴定肉毒梭菌的产毒基因，即bont/A、bont/B、bont/E和bont/F的基因。

1、核酸提取        

加热法：刮取至少10个菌落，悬浮于100μL的无菌水中，漩涡震荡10s（如果菌落未能均匀分散，可适当延长震荡时间），95℃或沸水浴5min，冷却至室温，12000rpm离心5min，吸取上清。

试剂盒法：可使用商品化的试剂盒提取细菌的基因组DNA。

2、反应体系配置

从试剂盒中取出预混液，充分融化，涡旋后短暂离心，取20μL置于PCR管或PCR板中，然后将模板各取5μL分别加入PCR管或PCR板中（每种模板要使用四种预混液），盖好管盖或板膜，短暂离心，立即进行PCR扩增反应。

3、PCR扩增       

PCR管或PCR板置于PCR仪上，推荐反应程序设定如下：反应体系为25μL，在第二步每个循环60℃时检测荧光信号，检测通道选择FAM、HEX（VIC）、CY5。

注：使用ABI系列PCR仪器，如果不添加ROX，“passive reference”和 “quencher”均选择“none”。